Klorofil adalah pigmen hijau yang ditemukan pada tumbuhan tingkat tinggi dan semua organisme fotosintesis lainnya. Klorofil A dan klorofil B larut dalam etanol, eter dan aseton dan pelarut lainnya, tidak larut dalam air dan petroleum eter, oleh karena itu, dapat menggunakan pelarut polar seperti aseton, metanol, etanol, etil asetat dan sebagainya untuk mengekstrak klorofil.
Proses ekstraksi klorofil:
Ekstraksi klorofil disiapkan di ruangan semi-gelap pada 25 derajat C. Langkah-langkah ekstraksi adalah sebagai berikut:
(1) Ambil 1000 gram daun hijau segar dan hancurkan dalam Wechsler.
(2) Masukkan 1000 gram daun hijau yang dihancurkan ke dalam aseton dengan sedikit kalsium karbonat (suhu 20 derajat ) untuk ekstraksi, sampai fragmen daun tidak berwarna setelah disaring dan dibersihkan.
(3) Masukkan ekstrak aseton yang telah disaring ke dalam corong yang berisi 1 liter petroleum eter dan 100mL aseton, kemudian putar perlahan sambil menambahkan air suling hingga terstratifikasi. Sebagian besar aseton dan pengotor yang larut dalam air di lapisan air dibuang, hanya menyisakan larutan petroleum eter.
(4) Setelah larutan petroleum eter dimurnikan lagi dengan air suling, dibersihkan lebih dari 5 kali dengan larutan metanol 200ml80 persen yang mengandung petroleum eter dan asam oksalat 0,01g, dan akhirnya diperoleh suspensi kuning-hijau .
(5) Keringkan suspensi dengan natrium sulfat anhidrat, dan masukkan ke dalam kolom yang terbuat dari bubuk sukrosa setebal 3 cm. Kemudian bersihkan pigmen yang mengendap untuk menghilangkan karotenoid dan membuatnya hanya mengandung klorofil alami.
(6) Kolom sukrosa yang mengandung klorofil alami dibagi menjadi dua lapisan, lapisan hijau memiliki klorofil B 4-10mm, lapisan biru lainnya adalah lapisan klorofil A 2-6mm.
(7) Bagian yang terletak di tengah lapisan biru (sekitar setengah dari lapisan biru) dimasukkan ke dalam eter, suspensi disaring dan diekstraksi, dibersihkan dengan air suling, dikeringkan dengan natrium sulfat, dan disaring dengan peralatan untuk mendapatkan klorofil. SEBUAH.
(8) Buang bagian tengah lapisan hijau di (6), dan segera masukkan ke dalam eter untuk disaring dan dicuci untuk membuat larutan klorofil B eter.
Bagaimana cara memisahkan selama ekstraksi?
Kromatografi merupakan metode penting untuk pemisahan, pemurnian dan identifikasi senyawa organik, terutama dalam mikroanalisis yang banyak digunakan. Pigmen dalam buah-buahan dan sayuran terutama meliputi karoten yang larut dalam lemak, lutein, klorofil dan antosianin yang larut dalam air. Dalam percobaan ekstraksi, kita dapat menggunakan prinsip penyaringan antosianin larut air yang dapat bercampur, yang pada gilirannya dapat menggunakan kromatografi lapis tipis, kromatografi kolom, kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) hingga pemisahan beta-karoten, lutein dan klorofil, melemah karena polaritas ketiga jenis pigmen pada gilirannya, dapat dengan tepat memilih pelarut organik tunggal atau rasio yang berbeda dari pelarut campuran sebagai agen ekspansi dan agen elusi, Kondisi pemisahan yang optimal ditentukan.
